一、洁净室（区）的概念

美国航空业的陀螺仪制造过程中最先提出了生产环境的洁净要求，为消除空气中的尘埃粒子对航空仪器的齿轮、轴承的污染。降低返工率，提高使用寿命。

1.洁净区定义：

2.洁净区的分类：

按照气流流型，可分为单向流洁净室和非单向流洁净室。

单向流洁净室

非单向流洁净室

3.适用的产品：

1.适用于通过最终灭菌方法、通过无菌加工技术使产品无任何存活微生物的医疗器械及体外诊断试剂产品的生产，如血管内支架、骨科植入物等。

2.适用于需要控制初始污染菌的医疗器械品种，如透析液（粉）等。

3.与产品直接接触的单包装。

4.构成：

生产用房：与生产产品工艺流程相对应的功能间，如注塑间、干燥间等。

检验用房：与检验有关的功能间，如阳性对照间、无菌检验间、微生物限度间等。

辅助功能用房：为生产服务的辅助功能间，如洗衣间、洁具间、链接各功能间的缓冲过滤通道。

二、洁净室（区）检测标准

引用英制单位（100级、10 000级、100 000级、300 000级）的标准有：

GB 50457-2008《医药工业洁净厂房设计规范》

GB/T 16292-2010《医药工业洁净室(区)悬浮粒子的测试方法》

GB/T 16293-2010《医药工业洁净室(区)浮游菌的测试方法》

GB/T 16294-2010《医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法》

YY 0033-2000《无菌医疗器具生产管理规范》等

引用ISO单位（1~9级）的标准有：

GB 50073-2013《洁净厂房设计规范》

GB 50591-2010《洁净室施工及验收规范》等

无菌医疗器具洁净室（区）环境要求及监测一般参照下表进行

检测方向：

三、洁净室（区）的验证

1.温度

洁净区空调系统不仅有多层净化空气的作用，还具有调节系统温度的能力。微生物在温度、湿度等条件适宜的情况下会不断地生长和繁殖。

要求：无特殊要求时（18~28）℃。

方法标准：

JGJ 71-1990；

GB 50591-2010《洁净室施工及验收规范》

检测点为房间中心一点，应在温度读数稳定后再记录。

2.湿度

保持洁净区空气适宜的湿度不仅能够保证工作人员的 舒适度，更能控制微生物的存活率，保证产品质量。

要求：（45～65）%

注意：

某些生产车间会根据产品特殊的生产工艺，对湿度有特殊的要求。例如某些IVD的一些特殊生产工艺环节要求空气湿度尽量干燥，达到30%以下。

方法标准：

JGJ 71-1990；

GB 50591-2010《洁净室施工及验收规范》

测量仪器的选择：

温湿度测量仪。其中湿度测量的量程（1～100）%， 分辨率0.1%，测量不确定度±2.5%。

3.气流组织形式与换气次数#p#分页标题#e#

气流组织：是指对气流流向和均匀度按一定要求进行组织的空气流动状态与分布。

单向流（百级）：沿单一方向呈平行流线并且与气流方向垂直的断面上风速均匀的气流。

非单向流（乱流）：其原理是靠洁净送风气流扩散、混合、不断稀释室内空气，把室内污染逐渐排出，达到平衡。

洁净室内各项指标的维持和调节都是通过换气来完成的，换气性能与其他所有项目都联系紧密。合理的换气次数、风速、气流组织形式是保证洁净室性能的前提条件。

方法标准：

JGJ 71-1990；

GB 50591-2010《洁净室施工及验收规范》

对于单向流洁净室，可采用截面平均风速和截面积乘积的方法确定送 风量。

垂直单向流洁净室的测定截面取距地面0.8m的无阻隔面（孔板、格栅除外）的水平截面，如有阻隔面，该测定截面应抬高至阻隔面之 上0.25m；

水平单向流洁净室取距送风面0.5m的垂直于地面的截面；

截面上测点间距应不大于1m，一般取0.3m，测点数应不少于20个，均匀布置。

换气次数的计算方法：换气次数（次/h）= 风速（m/s）x 送风口面积（㎡）x 3600/ 房间体积（m）。

对于非单向流洁净室，可采取风量罩法测量送风量并计算换气次数。

换气次数（次/h）= 房间送风量（m/h） / 房间体积（m）

4.静压差

保持合理的静压差是保证洁净室及相关受控环境抵抗外界污染、防止内部污染和交叉污染的重要措施。稳定的压差是保证洁净室洁净度等级的重要条件。

要求：

不同级别洁净室及洁净室与非洁净室之间≥5Pa；洁净室与室外大气≥10Pa。

方法标准：

JGJ 71-1990；

GB 50591-2010《洁净室施工及验收规范》

5.洁净度

影响洁净度的因素众多，可以分为内在因素和外在因素。内在因素包括 换气次数、压差、高效过滤器检漏、洁净区的密封性。外在因素包括人员、物品进出环境带来的尘埃粒子影响和洁净区日常清洁频率。

方法标准：

GB 50591-2010《洁净室施工及验收规范》

测量仪器：

粒子计数器

采样量：2.83L/min或28.3L/min。

粒径：0.3μm、0.5μm、1.0μm、3.0μm、5.0μm、10.0μm。

测试要点：

1. 必须按照测试仪器的检定周期，定期对测试仪器作检定。应使用检定合格，且在使用有效期内的仪器。

2. 测试仪器在未进入被测区域时，若必需，则先清洁表面，或在相应的洁 净室内准备和存放（用保护罩或其它适当地外罩保护仪器）。

3. 在100级洁净室内用纸时，上面应蒙上一张透明不沾尘的覆盖物，在100 级洁净室内不能用铅笔和橡皮。

4. 使用测试仪器时应严格按照仪器说明书操作。

4.1 仪器开机，预热至稳定后，方可按测试仪器说明书的规定对仪器进行校正，同时检查采样流量和等动力采样头。#p#分页标题#e#

4.2 采样管口置于采样点采样时，在计数趋于稳定后，开始连续读数。

4.3 采样管必须干净，严禁渗漏。

4.4 采样管的长度应根据仪器的允许长度。除另有规定外，长度不得大于1.5m。

4.5 粒子计数器采样口和仪器工作位置宜处在同一气压和温度下，以免产生测量偏差。

最少采样点数目：

悬浮粒子测试最少采样点数目可在以下两种方法中任选一种：

① NL= √A

式中：NL — 最少采样点；

√A — 洁净室或洁净区的面积，单位为平方米（m2）。

注：在单向流情况下，面积A可以认为是垂直于气流方向上的横截面积。

② 最少采样点数目可从下表查到。

采样点分布：

洁净室采样点的分布应均匀，避免在局部区域过于稀疏。在动态测试时，悬浮粒子采样点的分布应根据产品的生产及工艺关键操作区域设置。

下列多点采样的采样点布置图示可作参考：

采样点的位置应满足一下要求：

1.采样点一般在离地0.8m高度的水平面上均匀布置。

2.采样点多于5个时，也可以在离地面0.8~1.5m高度的区域内分层布置，但每层不少于5点。

采样次数的限定：

对于任何洁净室或局部空气净化区域，采样点的数目不得少于2个，总采样次数不得少于5次。每个采样点的采样次数可以多于1次，且不同采样点的采样次数可以不同。

最小采样量：

采样注意事项：

① 对于单向流洁净室（区），粒子计数器的采样管口应正对气流方向；对于非单向流洁净室（区），粒子计数 器的采样管口宜向上。

② 布置采样点时，应尽量避开回风口。

③ 采样时，测试人员应在采样口的下风侧，并尽量少活动。

④ 采样完毕后，宜对粒子计数器进行自净。

⑤ 应采取一切措施防止采样过程的污染。

结果计算：

悬浮粒子浓度的报出结果必须按照GB/T 16292-1996《医药工业洁净室（区）悬浮粒子的测试方法》中的要求进行计算。报出值应为95%置信上限。

结果评定：

判断悬浮粒子洁净度级别应依据下述的两个条件：

1.每个采样点的平均粒子浓度必须不大于规定的级别界限。

2.全部采样点的粒子浓度平均值的95%置信上限必须不大于规定的级别界限。

6.沉降菌

通过自然沉降收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适 宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养基上的菌落数来 判定洁净环境内的活微生物数，并以此来判断洁净室（区）的微生物浓度。

方法标准：

GB/T 16294-1996《医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法》

培养皿：

一般采用90mm×15mm规格的培养皿培养基：NA、TSA、SDA、其他经验证的培养基生化培养箱：控温范围：(0～60)℃并定期对培养箱进行温度的校准。#p#分页标题#e#

最少采样点数目：

沉降菌测试最少采样点数目可在以下两种方法中任选一种：

① NL= √A

式中：NL — 最少采样点；

√A — 洁净室或洁净区的面积，单位为平方米（m2）。

②查表

沉降菌的采样点位置同悬浮粒子的布点。

测试步骤：

① 测试前培养皿表面必须严格消毒。

② 将已制备好的培养皿按采样点布置图逐个放置，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中。

③ 静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上；动态测试时， 培养皿暴露时间为不大于4h。

④ 全部采样结束后，将培养皿放置于(30～35)℃培养箱中培养至少48小时。

⑤ 每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。

可每批选定3只培养皿作对照培养。

菌落计数：

① 用肉眼对培养皿上所有的菌落直接计数、标记或在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大镜检查是否遗漏。

② 若平板上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。

注意：

① 采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。

② 由于细菌种类繁多差别较大，计数时一般在背面透射光下观察。注意不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意菌落与培养基沉淀物的区别， 必要时用显微镜鉴别。

最少培养皿数：

在满足最少采样点数目的同时，还应满足最少培养皿数，见下表：

采样时注意事项：

① 布置采样点时，至少应尽量避开尘粒较集中的回风口。

② 采样时，测试人员应站在采样口的下风侧，并尽量少走动。

③ 应采取一切措施防止采样过程的污染和其他可能对样本的污染。

④ 培养皿在用于检验时，为避免培养皿运输或搬动过程造成的影响，宜同时进行对照试验，每次或每个区域取一个对照 皿，与采样皿同法操作但不需暴露采样，然后与采样后的培养 皿一起放入培养箱内培养，结果应无菌落生长。

⑤ 对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。

计算结果：

7.浮游菌

浮游菌的测试条件、状态、最少采样点数目、采样点布点、菌落计数与沉降菌相同。

测试步骤：

1. 测试前仪器、培养皿表面必须严格消毒。

2. 采样器进入被测房间前先用消毒房间的消毒剂灭菌，用 于100级洁净室的采样机宜预先放在被测房间内。

3. 用消毒剂擦净培养皿的外表面。

4. 采样前，先用消毒剂清洗采样器的顶盖、转盘以及罩子 的内外面，采样结束，再用消毒剂轻轻喷射罩子的内壁和转 盘。

5. 采样口及采样管，使用前必须高温灭菌。如用消毒剂对 采样管的外壁及内壁进行消毒时，应将管中的残留液倒掉并 晾干。#p#分页标题#e#

6.采样者应穿戴与被测洁净区域相应的工作服，在转盘上 放入或调换培养皿前，双手用消毒剂消毒或戴无菌手套操作。

7. 采样仪器经消毒后先不放入培养皿，开启浮游菌采样器， 使仪器中的残余消毒剂蒸发，时间不少于5min，并检查流量 并根据采样量调整设定采样时间。

8.关闭浮游菌采样器，放入培养皿，盖上盖子。

9. 置采样口于采样点后，开启浮游菌采样器进行采样。

10.全部采样结束后，将培养皿倒置于30℃～35℃培养箱 中培养不少于48小时。

11. 每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。 可每批选定3只培养皿作对照培养。

最小采样量：

注意事项：

① 对于单向流洁净室（区）或送风口，采样器采样口朝向应正对气流方向；对于非单向流洁净室（区），采样口向上。

② 布置采样点时，至少应尽量避开尘粒较集中的回风口。

③ 采样时，测试人员应站在采样口的下风侧，并尽量少走动。

④ 应采取一切措施防止采样过程的污染和其他可能对样本的污染。

⑤ 培养皿在用于检验时，为避免培养皿运输或搬动过程造成的影响，宜同时进行对照试验，每次或每个区域取一个对照皿，与采样皿同法操作但不 需暴露采用，然后与采样后的培养皿一起放入培养箱内培养，结果应无菌落生长。

结果判定：

① 每个测点的浮游菌平均浓度必须低于所选定评定标准中的界限。

② 在静态测试时，若某测点的浮游菌平均浓度超过评定标准，则应重新采样两次，两次测试结果均合 格才能判为符合。

8.照度

主要工作室一般照明的照度值为300lx。

辅助工作室的照度宜不低于150lx。

对照度有特殊需求的生产部位可设置局部照明。

9.噪声

洁净室内额空态噪声级，非单向流洁净室不应大于60dB，单向流、混合流洁净室不应大于65dB。